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          HJ 1216-2021 水質 浮游植物的測定 0.1 ml 計數框-顯微鏡計數法

          1 適用范圍

                本標準規定了測定水中浮游植物的 0.1 ml 計數框-顯微鏡計數法。本標準適用于地表水中浮游植物的密度測定。

          樣品濃縮 50 倍時,對角線方式計數方法檢出限為 9.2×10cells/L;行格方式計數方法檢出限為3.0×103 cells/L;全片方式計數方法檢出限為 9.2×102 cells/L;隨機視野方式計數的方法檢出限與觀察的視野數、顯微鏡視野面積有關,按附錄A 計算。

          2 規范性引用文件

                本標準引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本標準。凡是未注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本標準。

                GB/T 14581 水質 湖泊和水庫采樣技術指導

                HJ/T 91 地表水和污水監測技術規范

                HJ 494 水質 采樣技術指導

          3 術語和定義

                下列術語和定義適用于本標準。

          3.1

                浮游植物 phytoplankton

                在水中營浮游生活的微小藻類植物,通常浮游植物就是浮游藻類,包括原核的藍藻和其它各類真核藻類。

          3.2

                顯微鏡計數視野 microscope counting field

                顯微鏡視野中限定一定面積的區域,用于定量計數浮游植物。

          3.3

                檢出限 detection limit

                單次計數過程中,發現的概率不低于 99%時最低的浮游植物密度。

          4 方法原理

                在顯微鏡下,利用 0.1 ml 計數框對樣品中的浮游植物進行人工分類和計數,計算單位體積樣品中各種類浮游植物的細胞數量。

          5 試劑和材料

                除非另有說明,分析時均使用符合國家標準的分析純試劑,實驗用水為新制備的去離子水或蒸餾水。

          5.1 碘(I2)。

          5.2 碘化鉀(KI)。

          5.3 甲醛溶液:w(HCHO)37%40%。

          5.4 丙三醇(HOCH2CHOHCH2OH)。

          5.5 魯哥氏碘液:

                稱取 60 g 碘化鉀(5.2),溶于 100 ml 水中,再加入 40 g 碘(5.1),充分攪拌使其完全溶解,加水定容至 1000 ml,轉移至棕色磨口玻璃瓶,室溫避光保存。

          6 儀器和設備

          6.1 25 號浮游生物網:網孔直徑為 0.064 mm,網呈圓錐形,網口套在銅環上,網底端有出水開關活塞。

          6.2 定性采樣瓶:30 ml100 ml 廣口聚乙烯瓶。

          6.3 采水器:不銹鋼或有機玻璃材質,圓柱形。容量和深度規格要滿足采樣要求。

          6.4 定量采樣瓶:1 L2 L 廣口聚乙烯瓶。

          6.5 正置或倒置生物顯微鏡:物鏡 4×、10×、20×、40×,目鏡 10×或 15×。

          6.6 濃縮裝置:1 L2 L 筒形分液漏斗或量筒。

          6.7 樣品瓶:50 ml 具塞棕色玻璃廣口瓶。

          6.8 超聲波發生裝置:工作頻率 40 kHz,水浴方式。

          6.9 微量移液器:100 μl。

          6.10 0.1 ml 浮游植物計數框:面積 20 mm×20 mm,框內劃分橫豎各 10 行格,共 100 個小方格。

          6.11 蓋玻片:面積 22 mm×22 mm,厚度小于 0.2 mm。

          6.12 載物臺測微計:又稱鏡臺測微計,1 mm/100 DIV,分劃值為 0.01 mm。

          注:DIV 指等分格,1 mm/100 DIV 1 mm 等分成 100 格。

          6.13 目鏡分劃板:又稱目鏡測微尺,5 mm/50 DIV,分劃值為 0.1 mm。

          6.14 計數器。

          6.15 一般實驗室常用儀器和設備。

          7 樣品

          7.1 樣品的采集

          7.1.1 定性樣品

                點位布設及采樣頻次按照GB/T 14581、HJ/T 91 HJ 494 的相關規定執行。也可根據調查研究目的確定。

                使用 25 號浮游生物網(6.1)采集定性樣品。關閉浮游生物網底端出水活塞開關,在水面表層至 0.5 m 深處以 20 cm/s30 cm/s 的速度做“∞”形往復,緩慢拖動約 1 min3 min,待網中明顯有浮游植物進入,將浮游生物網(6.1)提出水面,網內水自然通過網孔濾出,待底部還剩少許水樣(5 ml10 ml)時,將底端出口移入定性采樣瓶(6.2)中,打開底端活塞開關收集定性樣品。采集分層樣品時,用 25 號浮游生物網(6.1)過濾特定水層樣品,其他步驟同采集表層樣品。定性樣品采集完成后及時將浮游生物網清洗干凈。樣品采集后冷藏避光運輸。

                如有定性樣品采集的技術規范,按技術規范有關要求執行。

          7.1.2 定量樣品

                按照GB/T 14581、HJ/T 91 HJ 494 的相關規定進行定量樣品的采集。

                用采水器(6.3)采集樣品至定量采樣瓶(6.4)中,一般采集不少于 500 ml 樣品。若水體透明度較高,浮游植物數量較少時,應酌情增加采樣體積。定量樣品采集后,樣品瓶不應裝滿,以便搖勻。

                注 1:有些浮游植物(如藍藻)常浮于水面或成片、條帶分布,可在此水華密集區域采樣作為峰值參考。注 2:定量樣品采集應在定性樣品采集之前。應保持固定時間段采樣,以便結果之間可相互比較。

          7.2 樣品的保存

          7.2.1 定性樣品

                定性樣品采集后立即加入魯哥氏碘液(5.5),用量為水樣體積的 1.0%1.5%。鏡檢活體樣品不加魯哥氏碘液固定。定性樣品在室溫避光條件下可保存 3 周;1  ℃~5  ℃冷藏避光條件下可保存 12 個月?;铙w樣品在 4 ℃~10 ℃避光條件下可保存 36 h。

          7.2.2 定量樣品

                定量樣品采集后立即加入魯哥氏碘液(5.5)固定,用量為水樣體積的 1.0%1.5%。也可將魯哥氏碘液(5.5)提前加入定量采樣瓶(6.4)中帶至現場使用。定量樣品在室溫避光條件下可保存 3 周;1 ℃~ 5 ℃冷藏避光條件下可保存 12 個月。

                樣品在保存過程中,應每周檢查魯哥氏碘液(5.5)的氧化程度,若樣品顏色變淺,應向樣品中補加適量的魯哥氏碘液(5.5),直到樣品的顏色恢復為黃褐色。

                注:若樣品需長期保存,應加入甲醛溶液(5.3),用量為水樣體積的 4%。

          8 分析步驟

          8.1 混勻樣品

                每次取樣前,采用上下顛倒至少 30 次的方式充分混勻所采樣品,混勻動作要輕。

          8.2 定性樣品的分析

                在顯微鏡(6.5)下觀察定性樣品(7.1.1),鑒定浮游植物的種類。優勢種類鑒定到種,其他種類至少鑒定到屬。部分物種鑒定參考資料見參考文獻。

                注:種類鑒定除用定性樣品觀察外,還可吸取已完成計數的定量樣品進行觀察。

           

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